1. 可以篩選不同蛋白-蛋白之間相互作用的強度;
2. 利用銅誘導的CUP1/ACE1系統(tǒng)能更有效的檢測體內蛋白相互作用;
3. 利用銅抗性這種嚴格的篩選,會出現(xiàn)很少的假陽性;
4. 利用GFP這種綠色熒光蛋白的報告基因,篩選陽性菌株可以節(jié)省大量的時間;
5. 篩選陽性菌株不需要外部酶底物,如X-Gal;
6. 適合高通量的篩選分析。
產品介紹:
酵母雙雜交系統(tǒng)是一種用于篩選體內蛋白-蛋白之間相互作用的方法,它依賴于DNA結合結構域和DNA激活結構域的分離,并將這兩個結構域基因分別與兩個蛋白基因融合在一起,如果兩種蛋白能夠相互作用,就會使這兩個結構域重組成一個有活性的轉錄因子復合物,這樣,就會使報告基因得以表達。
MoBiTec的ACE1雙雜交系統(tǒng)是一個強大的工具,它可以用于新基因的發(fā)現(xiàn)和功能分析,而且可以有效的鑒別體內蛋白-蛋白的作用。它將銅誘導的轉錄因子ACE1和銅抗性CUP1基因與作為報告基因綠色熒光蛋白GFP基因結合起來。兩種相互作用的蛋白分別與ACE1的DNA結合結構域和DNA激活結構域相融合,從而使我們可以通過下面的方法篩選:1.在含銅的培養(yǎng)基上生長的細胞;2.依賴銅表達的強熒光GFP可以通過紫外光檢測到。
因此,這種新技術,可以很有效的通過一步法篩選可能的陽性表達,即在含有銅的培養(yǎng)基上生長并發(fā)出綠色熒光的菌株。它是一種快速、高靈敏度和更值得信賴的檢測方法。不斷改變銅濃度還可以篩選出不同蛋白之間相互作用的強度。
特點與優(yōu)點:
1. 鑒定體內蛋白-蛋白相互作用:確定一個挑選的引誘蛋白與一個由cDNA文庫表達的蛋白結合區(qū)域;
2. 陽性菌落發(fā)出綠色熒光,通過一步就可篩選出可能的陽性;
3. 不需要煩瑣的β-半乳糖苷酶檢測;
4. 通過文庫半乳糖誘導性表達篩選存在潛在毒性的蛋白相互作用;
5. 很少的假陽性。
產品介紹:
這個雙雜交系統(tǒng)提供了一個高技術和巧妙的方法來研究蛋白相互作用,另外,能表現(xiàn)出蛋白相互作用時的結構域、氨基酸殘基和必須的條件,最終可確定新的蛋白,這種篩選能力使其成為基因發(fā)現(xiàn)和功能分析的強大工具。
這個系統(tǒng)簡化和加快了篩選過程,它將報告蛋白GFP和LexA蛋白結合起來構建了酵母雙雜交系統(tǒng)。
蛋白的相互作用,導致了兩個報告基因(LEU2營養(yǎng)篩選基因和GFP基因)的表達,LEU2的表達,使酵母可以在缺少亮氨酸的培養(yǎng)基上生長,而GFP基因的表達,則可使酵母在紫外光下發(fā)出綠色熒光。
使用綠色熒光蛋白GFP作為報告元件避免了費時的β-半乳糖苷酶檢測,特殊的GFP變異體由pGNG1質粒表達的,它比野生型GFP發(fā)出的熒光要強18倍,兩種蛋白相互作用的酵母菌落發(fā)出的綠色熒光可以很容易的被檢測出來。
PSKAN pSKAN Phagemid Display System
PS1255 18mer-sequencing primer 1255 500 pmole
PS2897 19mer-sequencing primer 2897 500 pmole
PSKAN3 pIII antibody (monoclonal mouse IgG1) 100 μl
PSKAN2 anti-hPSTI antibody (monoclonal mouse IgG1) 100 μl
PSKAN8 pSKAN8 vector DNA, lyophilized 5 μg
PSKAN4 pMAMPF3-PSTI4 vector DNA, lyophilized 5 μg