人瘦素(Leptin) ELISA Kit

人瘦素(Leptin) ELISA Kit的用途：用于血清、血漿及相關(guān)液體樣本中瘦素(Leptin) 的測(cè)定。
人瘦素(Leptin) ELISA Kit的工作原理
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定樣品中瘦素(Leptin) 的水平。向預(yù)先包被了瘦素(Leptin) 單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入瘦素(Leptin) ，溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗瘦素(Leptin) 抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中瘦素(Leptin) 的濃度呈正相關(guān)。
人瘦素(Leptin) ELISA Kit的試劑盒組成
1     標(biāo)準(zhǔn)品（960pg/ml）    0.5ml     
2     顯色劑A液   6ml
3     標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液       3ml 
4     顯色劑B液   6ml
5     酶標(biāo)包被板    12孔×8條
6     終止液    6ml
7     鏈霉親和素-HRP   6ml 
8     說明書    1份
9     30倍濃縮洗滌液   20ml      
10    封板膜    2張
11    生物素標(biāo)記抗體    1ml 
12    密封袋    1個(gè)

人瘦素(Leptin) ELISA Kit需要而未提供的試劑和器材
1．37℃恒溫箱。
2．標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3．精密移液器及一次性吸頭
4．蒸餾水，
5．一次性試管
6．吸水紙
注意事項(xiàng)
1．從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。
3．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
4．為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
5．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
6．底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

人瘦素(Leptin) ELISA Kit的標(biāo)本要求
1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
人瘦素(Leptin) ELISA Kit的操作程序
1．標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請(qǐng)按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
480pg/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）     120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
240pg/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）     120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
120pg/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）     120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60pg/ml  （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）     120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30pg/ml  （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）     120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3．加樣：1）空白孔：空白對(duì)照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗瘦素(Leptin) 抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，鏈霉素-HRP50μl（標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體，故不加）；3)待測(cè)樣品孔:加入樣本40μl，然后各加入抗- 瘦素(Leptin) 抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
4．配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5．洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6．顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
7．終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
8．測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。