免疫熒光實驗技術(shù)服務(wù)
熒光免疫測定技術(shù)的概念:
將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標記,試劑與標本中相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后,測定復(fù)合物中的熒光素,這種免疫技術(shù),稱為免疫熒光素技術(shù)。
常見熒光素: ⑴ FITC ⑵ RB200 ⑶ TRITC ⑷ 鑭系:Eu、Tb ⑸ PE ⑹ 其它
實驗步驟:
1. 4 μ m石蠟切,60℃烤,30min。
2. 常規(guī)脫蠟至水(二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10min,無水乙醇,95%乙醇,85%乙醇,75%乙醇各2min)。
3. PBS洗(磷酸鹽緩沖液0.01mol/L pH7.4)3×3min。
4. 0.1%胰蛋白酶(100ml蒸餾水中加入100mg胰蛋白酶,100mg氯化鈣,用0.1N NaoH調(diào)pH至7.6),37℃,消化30min。(或其他修復(fù)方法)
5. 0.01mol/L pH7.4 PBS洗3×3min。
6. 兔抗人AFP1:50(用專用抗體稀釋液稀釋)37℃,1h或室溫4h,或4℃過夜。
7. PBS洗3×3min。
8. 羊抗兔IgG-F,1:20稀釋,37℃,1h,室溫2h。
9. PBS洗3×3min。
10.蒸餾水洗3min。
11.pH9.0緩沖甘油封片。
12.鏡檢,陽性呈明亮綠色熒光。
熒光信號增強封片劑
mowiol 40-88 4.8g
甘油 12ml
蒸餾水 12ml
0.2mol/L Tris(pH8.5) 24ml
上述混合(加熱溶解),5000g離心,15min,最后加入1.4-diazobicydo-[2,2,2]-octane(DABcos),終濃度2.5%(約1.25g),溶解后,分裝存于-20℃中。
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