免疫熒光實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

熒光免疫測(cè)定技術(shù)的概念：
將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，試劑與標(biāo)本中相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，測(cè)定復(fù)合物中的熒光素，這種免疫技術(shù)，稱為免疫熒光素技術(shù)。

常見熒光素：    ⑴ FITC  ⑵ RB200  ⑶ TRITC  ⑷ 鑭系：Eu、Tb  ⑸ PE  ⑹ 其它

實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 4 μ m石蠟切，60℃烤，30min。
2. 常規(guī)脫蠟至水（二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10min，無水乙醇，95％乙醇，85％乙醇，75％乙醇各2min）。
3. PBS洗（磷酸鹽緩沖液0.01mol/L pH7.4）3×3min。
4. 0.1%胰蛋白酶（100ml蒸餾水中加入100mg胰蛋白酶，100mg氯化鈣，用0.1N NaoH調(diào)pH至7.6），37℃，消化30min。（或其他修復(fù)方法）
5. 0.01mol/L pH7.4 PBS洗3×3min。
6. 兔抗人AFP1:50（用專用抗體稀釋液稀釋）37℃，1h或室溫4h，或4℃過夜。
7. PBS洗3×3min。
8. 羊抗兔IgG-F，1:20稀釋，37℃，1h，室溫2h。
9. PBS洗3×3min。
10.蒸餾水洗3min。
11.pH9.0緩沖甘油封片。
12.鏡檢，陽(yáng)性呈明亮綠色熒光。

熒光信號(hào)增強(qiáng)封片劑
   mowiol 40-88         4.8g
   甘油                 12ml
   蒸餾水               12ml
   0.2mol/L Tris(pH8.5) 24ml
上述混合（加熱溶解），5000g離心，15min，最后加入1.4-diazobicydo-[2,2,2]-octane(DABcos)，終濃度2.5%(約1.25g)，溶解后，分裝存于-20℃中。

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