液氮保藏法，亦稱超低溫保藏法。主要利用微生物在低于-130°C的低溫下新陳代謝趨于停止的原理，在液氮中（-196°C的超低溫下）有效地進行菌種保藏的方法。此法操作簡便、高效，保藏期一般可達到15年以上，是目前公認的菌種長期保藏技術(shù)之一，并且適用于各類微生物菌種的保藏。

　　但是，采用液氮保藏，需購置超低溫液氮設備，且液氮消耗量大，費用高。液氮低溫保藏的保護劑，一般選擇甘油、二甲基亞砜、糊精、血清蛋白、聚乙烯氮戊環(huán)、吐溫80等，常用的是甘油（10%?20%），不同微生物應選擇不同的保護劑，保護劑的濃度應控制在不造成微生物死亡為宜。

　　操作方法：

　　把微生物細胞混懸于含保護劑（20%甘油，10%DMSO等）的液體培養(yǎng)基中（也可把含菌瓊脂塊直接浸入含保護劑的培養(yǎng)液中），分裝入耐低溫的安瓿瓶中后，作緩慢預冷，然后移至液氮罐中的液相（-196℃）或氣相（-156℃）作長期超低溫保藏。

　　操作原則：

　　“慢凍快溶”。

　　原理：

　　利用微生物在-130℃以下新陳代謝趨于停止而有效地保藏微生物。

　　0.5mol/L左右的甘油或二甲亞砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）可透入細胞，并通過降低強烈的脫水作用而保護細胞。

　　保藏期長（15年以上），且適合保藏各類微生物，尤其適宜于保存難以用冷凍干燥保藏法保藏的微生物，如支原體、衣原體、不產(chǎn)孢子的真菌、微藻和原生動物等。

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